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操作步驟如下:
1.沙土管制備
將河沙用60目過(guò)篩,棄去大顆粒及雜質(zhì),再用80目過(guò)篩,去掉細(xì)沙。用吸鐵石吸去鐵質(zhì),放入容器中用10%鹽酸浸泡,如河沙中有機(jī)物較多可用20%鹽酸浸泡。24小時(shí)后倒去鹽酸,用水洗泡數(shù)次至中性,將沙子烘干或曬干。
另取地面下40~60cm非耕作層貧瘠且粘性較小的土,研碎,100目過(guò)篩,水洗至中性,烘干。
將處理后的沙、土按質(zhì)量比2∶1混合?;靹虻纳惩练盅b入安瓿管或小試管中,高度為1cm左右,塞好棉塞,121℃濕熱滅菌30min。
隨機(jī)抽取滅菌后的砂土管若干支,無(wú)菌條件下取少許砂土至營(yíng)養(yǎng)肉汁培養(yǎng)基中,30℃培養(yǎng)24小時(shí),檢查無(wú)微生物生長(zhǎng)后方可使用。
2.斜面培養(yǎng)物的制備
參照定期移植法。
3.制備菌懸液
向培養(yǎng)好的斜面培養(yǎng)物中注入3~5mL無(wú)菌水,洗下細(xì)胞或孢子制成菌懸液。用無(wú)菌吸管吸取菌懸液,均勻滴入沙土管中,每管0.2~0.5mL。放線菌和霉菌可直接挑取孢子拌入沙土管中。
4.干燥
真空抽去沙土管中水分。
5.保藏
將沙土管用火焰熔封后存放于低溫(4~6℃)干燥處保藏,每隔半年檢查一次菌種存活性及純度。或?qū)⑸惩凉苤苯佑门Fぜ埢蛩芰霞埌?,置干燥器?nèi)保存。
保藏時(shí)間2~10年。
6.恢復(fù)培養(yǎng)
無(wú)菌條件下打開沙土管,取部分沙土粒于適宜的斜面培養(yǎng)基上,長(zhǎng)出菌落后再轉(zhuǎn)接一次?;蛉∩惩亮S谶m宜的液體培養(yǎng)基中,增殖培養(yǎng)后再轉(zhuǎn)接斜面。