接種

1、接種定義
接種：將微生物接到適于它生長繁殖的人工培養(yǎng)基上或活的生物體內(nèi)的過程叫做接種。
 
2、接種工具
在實驗室中，用得多的接種工具是接種環(huán)、接種針。有時滴管、吸管也可作為接種工具進行液體接種。在固體培養(yǎng)基表面要將菌液均勻涂布時，需要用到涂布棒。
1．接種針 2.接種環(huán) 3.接種鉤 4.玻璃涂棒 5.接種圈  6.接種鋤  7.小解剖刀
 
3、微生物檢驗常見接種方法
（1）劃線接種法
 
平板劃線分離法--分區(qū)劃線分離法
①用接種環(huán)先將培養(yǎng)物涂布于平板1區(qū)并作數(shù)次劃線，再在2、3……區(qū)依次劃線；
②每劃完一個區(qū)域，轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿約70度角，并將接種環(huán)滅菌一次，待冷后再劃下一區(qū)域；
③每一區(qū)域的劃線均接觸上一區(qū)域的接種線1～2次，使接種量逐漸減少，以獲得單個菌落；
④其他操作與上述曲線劃線分離法相同。
 
（2）斜面接種法
主要用于經(jīng)劃線分離培養(yǎng)所獲得的單個菌落的移種，以及觀察細菌的某些培養(yǎng)特征。
以菌種移種為例，其接種方法是：
①取一菌種管和培養(yǎng)基管，置左手食指、中指、無名指間，拇指壓住兩管底部上側(cè)面，使菌種管位于外側(cè)，培養(yǎng)基管位于內(nèi)側(cè)；
②右手拇指和食指分別旋松兩管棉塞?；鹧鏈缇臃N環(huán)；
③以右手小指與手掌，小指與無名指分別夾取棉塞（先外管后內(nèi)管），將兩管口迅速通過火焰1~2次；
 
 
④將已滅菌的接種環(huán)伸入菌種管中，從斜面上取菌少許，迅速伸入待接種的培養(yǎng)基管中，在斜面底部向上劃一條直線，然后從底部起向上作曲折連續(xù)劃線，直至斜面上方頂端；
⑤取出接種環(huán)，火焰滅菌管口，塞上棉塞（先塞內(nèi)管）；后將接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌放好；
⑥做好標識，置35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18~24小時。斜面培養(yǎng)一般形成均勻一致的菌苔。一般可觀察表面、透明度、色澤等特征。
 
（3）涂布接種法 
涂布法接種是一種常用的接種方法，不僅可以用于計算活菌數(shù)，還可以利用其在平板表面生長形成菌苔的特點用于檢測化學因素對微生物的抑殺效應。
原理：將定量濃度，定量的待分離菌液移到已凝固的培養(yǎng)基平板上，再用涂布棒快速地將其均勻涂布，使長出單菌落而達到分離的目的。
 
 
（4）液體接種法（肉湯接種）
①如斜面接種法持好菌種管及培養(yǎng)基管；
②滅菌接種環(huán)，從菌種管取菌，伸入培養(yǎng)基管中，在接近液面的管壁上方輕輕研磨，并沾取少許培養(yǎng)基液體調(diào)和，使細菌混合于培養(yǎng)基的液體中。液體培養(yǎng)基一般以18~24小時培養(yǎng)后觀察生長特征。
肉湯培養(yǎng)可觀察如下幾項：
a.發(fā)育程度：有無生長、微弱、中等、旺盛；
b.混濁度：有無及程度（混、中等、微混、透明）、均勻混濁、有顆粒、絮狀生長；
c.沉淀：有無及量多少、性狀（粉狀、顆粒狀、絮狀、沾性）；
d.表面：有無生長、性狀（膜狀、環(huán)狀）、菌膜厚薄及表面特征（光滑、顆粒、皺狀）；
e.其他：有無特別氣味，色素。如果是糖發(fā)酵培養(yǎng)基則主要觀察是否產(chǎn)酸和有無氣體。
 
（5）穿刺接種法（半固體接種）
多用于保存菌種、觀察動力及厭氧培養(yǎng)等也可以用于觀察細菌的某些生化反應。
①如斜面接種法持好菌種管及培養(yǎng)基管；
②以滅菌接種針從菌種管取菌，垂直刺入培養(yǎng)基的中心（半固體或一般瓊脂高層）直達近管底部（但不能刺到管底），接種針應沿原路退出；
③經(jīng)培養(yǎng)后半固體培養(yǎng)基可觀察到：沿穿刺線生長，線外的培養(yǎng)基清亮表示細菌無動力；穿刺線模糊不清，或沿穿刺線向外擴散生長，或整個培養(yǎng)基混濁表示細菌有動力。
 
 
 
 
 
 
分離純化



 
1、幾個定義 
混和培養(yǎng)物：含有一種以上的微生物培養(yǎng)物稱為混和培養(yǎng)物（Mixed culture）；
純培養(yǎng)：如果在一個菌落中所有細胞均來自于一個親代細胞，那么這個菌落稱為純培養(yǎng)（Pure culture）；
分離純化：在進行菌種鑒定時，所用的微生物一般均要求為純的培養(yǎng)物，得到純培養(yǎng)的過程稱為分離純化。包括傾注平板法、涂布平板法、平板劃線法等等。 
 
2、傾注平板法（倒平板）
將無菌培養(yǎng)皿放入生物安全柜或凈化臺中，然后分別倒入15ml已融化并且冷卻至45℃左右的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，加蓋后輕輕搖動培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基均勻分布，待凝固之后，把這平板倒置在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。單一細胞經(jīng)過多次增殖后形成一個菌落，取單個菌落制成懸液，重復上述步驟數(shù)次，便可得到純培養(yǎng)物。整個操作過程應嚴格按照無菌操作。