1、定義　
是指在執(zhí)行實驗過程中，防止微生物侵入機體和保持無菌物品及無菌區(qū)域不被污染的操作技術(shù)和管理方法；
無菌操作技術(shù)是微生物實驗的基本技術(shù)，是保證微生物實驗準(zhǔn)確和順利完成的重要環(huán)節(jié)。
 
2、內(nèi)容
無菌操作技術(shù)主要包括兩方面：
1）創(chuàng)造無菌的培養(yǎng)環(huán)境。包括提供密閉的培養(yǎng)容器、培養(yǎng)容器的滅菌、培養(yǎng)基的滅菌等；
2）在操作和培養(yǎng)過程中防止其它微生物的侵入的措施。包括紫外線殺菌、甲醛熏蒸、超凈臺的消毒與檢測、操作工具、器皿滅菌、操作方法等。
 
3、無菌操作原則
1）在執(zhí)行無菌操作時，須明確物品的無菌區(qū)和非無菌區(qū)，接種時須穿工作服、戴工作帽，應(yīng)在進無菌室前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球?qū)⑹植粮蓛簦?/span>
 
2）在操作前20～30分鐘要先啟動超凈臺和紫外燈，進行接種所用的吸管、平皿及培養(yǎng)基等須經(jīng)消毒滅菌，打開包裝未使用完的器皿，不能放置后再使用，金屬用具應(yīng)高壓滅菌或用95%酒精點燃燒灼3次后使用。嚴(yán)禁用手直接拿無菌物品，如瓶塞等，而須用消毒的鉗、鑷子等；
 
3）從包裝中取出吸管時，吸管尖部不能觸及外露部位，使用吸管接種于試管或平皿時，吸管尖不能觸及試管或平皿邊；
 
4）接種樣品、轉(zhuǎn)種細菌須在酒精燈前操作，接種細菌或樣品時，吸管從包裝中取出后及打開試管塞都要通過火焰消毒；
 
5）接種環(huán)或接種針在接種細菌前應(yīng)經(jīng)火焰燒灼全部金屬絲，須時還要燒到環(huán)和針與桿的連接處；
 
6）吸管吸取菌液或樣品時，應(yīng)用相應(yīng)的橡皮頭吸取，不得直接用口吸。傾倒平板應(yīng)在超凈臺內(nèi)操作，并且在開啟和加蓋瓶塞時需反復(fù)用酒精燈燒。
 
無菌操作的環(huán)境要求



 
1、無菌室
（1）無菌室的結(jié)構(gòu)：更衣間、緩沖間、操作間；
 
（2）無菌室的消毒和防污染
?每日（使用前）紫外線照射（0.5~1小時）； 
?每月用新潔爾滅擦拭地面和墻壁一次的方式進行消毒；
?每季度用甲醛、乳酸、過氧乙酸熏蒸（2小時），特別情況下可增加熏蒸頻次。
 
（3）無菌室使用要求
①無菌室內(nèi)應(yīng)保持清潔，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，拭擦工作臺面，不得存放與實驗無關(guān)的物品；
②無菌室使用前后應(yīng)將門關(guān)緊，打開紫外線，如采用室內(nèi)懸吊紫外燈消毒時，需30W紫外燈，距離在1.0m處，照射時間不少于30min，使用紫外燈，應(yīng)注意不得直接在紫外線下操作，以免引起損傷，燈管每隔兩周需用酒精棉球輕輕拭擦，除去上面灰塵和油垢，以減少紫外線穿透的影響；
③處理和接種食品標(biāo)本時，進入無菌室操作，不得隨意出入，如需要傳遞物品，可通過小窗傳遞。在無菌室內(nèi)如需要安裝空調(diào)時，則應(yīng)有過濾裝置。
 
2、超凈工作臺
超凈臺的使用與保養(yǎng)：
（1）風(fēng)速穩(wěn)定，且符合要求；
（2）使用前開啟紫外燈照射30分鐘以上；
（3）讓超凈臺預(yù)工作10－15分鐘；
（4）使用完畢后，用70%酒精將臺面和臺內(nèi)四周擦拭干凈。
 
3、無菌器材
（1）滅菌器材：玻璃器皿、培養(yǎng)基、無菌衣等；
（2）消毒器材：無菌室內(nèi)的凳子、試管架、天平、工作臺、手等。
（3）無菌間一般只允許放置無菌操作臺、轉(zhuǎn)椅等物品；無菌操作臺上一般只允許擺放以下物品：酒精燈、打火機、接種針、消毒棉球、洗耳球、鑷子、油性筆、滅菌平皿、試管架、滅菌吸管、電子天平、250ml滅菌三角瓶、培養(yǎng)基、均質(zhì)器等。
 
無菌操作原則



 
1、無菌接種操作
培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌后，用經(jīng)過滅菌的工具（如接種針和吸管等）在無菌條件下接種含菌材料（如樣品、菌苔或菌懸液等）于培養(yǎng)基上，這個過程叫做無菌接種操作。
在實驗室檢驗中的各種接種須是無菌操作。
 

2、微生物檢驗過程中的無菌操作要求
（1）在操作中不應(yīng)有大幅度或快速的動作；
（2）使用玻璃器皿應(yīng)輕取輕放；
（3）在正火焰上方操作；
（4）接種用具在使用前、后都須灼燒滅菌；
（5）在接種培養(yǎng)物時，協(xié)作應(yīng)輕、準(zhǔn)；
（6）不能用嘴直接吸吹吸管；
（7）帶有菌液的吸管、玻片等器材應(yīng)及時置于盛有5%來蘇爾溶液的消毒桶內(nèi)消毒。
 
3、無菌操作技術(shù)詳細圖解
（1）取菌技巧
 
 
 
（2）接種技巧
 
（3）錯誤示范